Komplet za testiranje nukleinske kiseline SARS-CoV-2

Namjena:

Komplet za testiranje nukleinske kiseline SARS-CoV-2 primjenjuje se za kvalitativno otkrivanje nukleinske kiseline COVID-19 u brisevima nazofarinksa, orofaringealnih briseva i sputumu. Rezultati testa pružaju osnovu za molekularnu dijagnozu za infekciju ili sumnjive pacijente i ne smiju se koristiti kao jedini kriterij za kliničku dijagnozu.

materijali:

Postupak ispitivanja:

A. Priprema uzorka

Ekstrahirana RNA je početni materijal za SARS-CoV-2 test nukleinske kiseline.

Važno: Svaki postupak ekstrakcije nukleinske kiseline mora se izvoditi istovremeno s jednom pozitivnom kontrolom (40 μL, razrijediti sterilnim fiziološkim otopinama/PBS do željenog volumena) i jednom negativnom kontrolom (40 μL, razrijediti sterilnim fiziološkim otopinama/PBS do željenog volumena).

Preporuča se korištenje sljedećih komercijalnih kompleta za ekstrakciju nukleinskih kiselina: PureLinkTM Mini Kit za virusnu RNA/DNA (Invitrogen); Mini kit virusne RNA (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA komplet (TIANGEN);

B. Postavljanje reakcijske smjese

1. Sve reagense i uzorke treba u potpunosti odmrznuti, potpuno promiješati i kratko centrifugirati na sobnoj temperaturi (približno raspon od 18 do 25 stupnjeva) prije upotrebe.

2. Pripremite potrebnu količinu reakcijske smjese u polipropilenskoj mikrocentrifugalnoj cijevi odgovarajuće veličine.

3. Odpipetirajte 25 µL reakcijske smjese u svaku potrebnu jažicu odgovarajuće optičke 96-reakcione ploče ili odgovarajuće optičke reakcijske cijevi.

C. Dodavanje predloška

1. Dodajte 5 μL ekstrahirane RNA iz uzoraka/pozitivne kontrole/negativne kontrole. Ukupni volumen je 30 μL.

2. Temeljito pomiješajte uzorke i kontrole s reakcijskom smjesom pipetiranjem gore-dolje/Vortex.

3. Zatvorite reakcijsku ploču 96-jažice odgovarajućim poklopcima ili optičkim ljepljivim filmom i reakcijske cijevi odgovarajućim poklopcima.

4. Centrifugirajte reakcijsku ploču 96-jažice u centrifugi s rotorom mikrotitarske ploče 30 sekundi pri približno 2500 okretaja u minuti.

D. Programiranje PCR instrumenta u stvarnom vremenu

Za osnovne informacije o postavljanju i programiranju različitih PCR instrumenata u stvarnom vremenu, molimo pogledajte korisnički priručnik za odgovarajući instrument. Analiza je optimizirana za ABI7500 PCR sustav u stvarnom vremenu. PCR izvođenje se izvodi s ciklusnim uvjetima kako je opisano u donjoj tablici.

Definirajte detektore fluorescencije

*Molimo postavite internu referencu fluorescencije instrumenta na "None", na primjer: Za instrumente serije ABI postavite "Passive Reference" na "None".

E. Analiza podataka

Molimo postavite parametre analize i analizirajte podatke prema uputama za uporabu relevantnih instrumenata.

Uzmimo ABI 7500 kao primjer:

Osnovna vrijednost treba biti postavljena na raspon koji eliminira pozadinsku fluorescenciju pronađenu u ranim ciklusima pojačanja, ali koji ne preklapa područje gdje se signali pojačanja uzdižu iznad pozadine (početna vrijednost: 3~10; krajnja vrijednost: {{2} }). Prag ciklusa (Ct) trebao bi biti u bazi eksponencijalne faze. Kliknite "Analiza" da biste automatski dobili rezultat analize i pročitajte rezultat detekcije u prozoru "Izvješće".

Popularni tagovi: sars - cov-2 nukleinska kiselina ispitati komplet, Kina, dobavljači, proizvođači, tvornica, rasuti